圖片來源：《中國腫瘤臨床與康復雜志》

共識第二部分：EGFR-TKIs治療耐藥的輔助判斷及免疫微環境特征

該部分第三點提及分子病理學檢測對于EGFR-TKIs耐藥患者建議二次組織活檢并進行耐藥基因檢測。常用的分子診斷檢測技術包括但不限于免疫組織化學(immunohistochemistry，IHC)、熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，FISH)、逆轉錄聚合酶鏈式反應(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)、微滴式數字PCR(droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR)、Sanger測序和下一代高通量測序(next-generation sequencing，NGS)技術等。

（1）EGFR T790M檢測：對于第一、二代EGFR-TKIs耐藥后無法獲取組織的患者，可從外周血或胸、腹腔積液中提取循環腫瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)進行EGFR T790M檢測。當ctDNA陰性時，仍應建議患者行組織檢測以明確EGFR T790M突變狀態。

（2）EGFR、間質上皮細胞轉化因子(mesenchymal-epithelial transition factor，MET)等多基因檢測：經濟成本可接受的情況下，建議對EGFR-TKIs耐藥后的患者進行多基因檢測。NGS或RT-PCR多基因聯合檢測可同時對多個靶點基因的突變、擴增和重排進行檢測，NGS測序尤其在鑒別EGFR C797S/T790M順式及反式突變構象等方面更具優勢。T790M/C797S順式突變為2個基因突變位于同一條DNA鏈上，而T790M/C797S反式突變為2個基因突變位于不同的DNA鏈上。可以使用1種或多種方法聯合進行廣譜分子檢測，包括但不限于間變性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)重排、c-ros肉瘤致癌因子-受體酪氨酸激酶(ROS proto-oncogene 1, receptor tyrosine kinase，ROS1)融合、轉染重排基因(rearranged during transfection，RET)重排、鼠類肉瘤病毒癌基因同源物B1(v-raf murine sar-coma viral oncogene homolog B1，BRAF)基因突變、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog，KRAS)突變、神經營養因子受體酪氨酸激酶1/2/3(neurotrophic receptor tyrosine kinase 1/2/3，NTRK1/2/3)基因融合、磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶催化亞基α(phosphatidylinositol-4，5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha，PIK3CA)突變、MET擴增或過表達、人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)突變或擴增等，以識別耐藥機制。

FISH是MET擴增檢測的金標準，但當前MET擴增檢測存在兩大挑戰：

①缺乏統一臨界值，有專家共識推薦判斷標準為MET拷貝數≥5或MET/CEP7≥2，而塞普替尼獲批的SACHI Ⅲ期研究設定了差異化閾值，對于第一、二代EGFR-TKIs一線治療耐藥后MET擴增定義為MET拷貝數≥5或MET/CEP7≥2，對于第三代EGFR-TKIs一線治療耐藥后MET擴增定義為MET拷貝數≥10；

②NGS檢測雖與FISH有較好的一致性，但由于不同實驗室可能使用不同的NGS平臺和生物信息學分析策略，MET擴增的臨界值不同，檢測結果的呈現方式也可能有所不同。

在EGFR-TKIs治療過程中，動態監測ctDNA變化可早于影像學及血清學腫瘤標志物識別EGFR突變，繪制腫瘤的基因組圖譜，并提供有關耐藥突變出現的實時動態信息，有助于臨床及時調整治療方案。

共識推薦1：患者服用EGFR-TKIs期間，建議定期做常規復查，進行頸胸腹部（包括腎上腺）增強或平掃CT（頸部淋巴結及腹部檢查可考慮超聲），如有癥狀惡化隨時復查。隨訪頻率可根據治療階段和臨床情況調整。目前隨訪方案主要基于臨床經驗，未來需更多循證依據優化。（證據級別：V類；推薦級別：強推薦）

共識推薦2：對于EGFR-TKIs耐藥的患者，推薦二次活檢和基因檢測。若組織標本不可及，可考慮液體活檢。根據基因檢測結果，識別耐藥機制，及時調整方案。（證據級別：Ⅰ類；推薦級別：強推薦）

數字PCR以其高靈敏度、絕對定量的顯著特色，在腫瘤伴隨診斷領域發揮日益重要的作用。隨著平臺通量的迭代提升，利用數字PCR亦可進行多位點的高通量檢測，對臨床輔助診斷提供重要依據。

貨號：BP-EGFR-2025；規格：24人份

本品適用于伯樂QX600微滴式數字PCR，以DNA為模板的EGFR基因突變檢測。本品包含1管BCY Digital PCR Supermix(no dUTP)濃度為2 ×，4管引物探針混合液，分別是ddPCR Assay for EGFR 19del/L858R、ddPCR Assay for EGFR G719X/20ins-1、ddPCR Assay for EGFR L861Q/S768I、ddPCR Assay for EGFR T790M/20ins-2，每管引物探針分孔使用。 各反應孔檢測位點及熒光標記具體見下表1。配制數字PCR反應體系時，模板與本品試劑混合后即可。反應體系特異性好，靈敏度高。

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